显微图像统计分析

 

 

对于微生物学,细胞培养,许多应用程序需要使用的细胞悬浮液,它是必要的,以确定细胞浓度。经常可以暂停分光光度计测定细胞密度,但是,这种形式的决心不允许评估细胞活力,也不能区分细胞类型。


用于确定每单位体积暂停的细胞数量的设备被称为计数室。室使用Zui广泛的类型,被称为血球,因为它Zui初是为执行血细胞计数。


 


为了准备计数室的镜像用镜头纸仔细清洗抛光面。盖玻片也清洗干净。计数商会盖玻片特制的,厚度比传统的显微镜,因为他们必须重到足以克服一滴液体的表面张力。盖玻片放置在计数表面之前,将细胞悬液。暂停引入巴斯德或其他类型的吸管的V形井之一。盖玻片下的面积,通过毛细作用填满。应引入足够的液体,使镜像表面覆盖。收取的计数室,然后放在显微镜舞台上,并带来了低功耗计数电网成为关注的焦点。


 


重要的是具有较高的功率目标是非常小心,因为计数室是比传统的幻灯片厚。如果用户不小心,可能会损坏室或物镜。纽鲍尔裁决标准hemacytometers整个电网可以看出,在40X(4X目标)。主要部门分成9大广场(就像一个井字脚趾电网)电网。每平方米有一平方毫米的表面面积,室的深度为0.1 mm。因此,整个点票网的0.9立方毫米的体积下一个谎言。


悬浮液应稀释不够,使细胞或其他颗粒不重叠对电网对方,并应均匀分布。要执行计数,确定认识到所需要的细胞类型需要的放大倍率。现在系统算在选定的正方形的细胞,使总数是100个细胞左右(需要的细胞计数统计学意义数)。对于大型的细胞,这可能意味着计数的四个大型角广场和中间的一个。对于一个密集的小细胞,你不妨细胞计数在4个1 / 25平方毫米的角落,加上在中央广场的中间广场悬挂。在一个特定的点票行话总是决定,以避免偏见。对于重叠裁决的细胞,细胞计数“”如果重叠的顶部或右的裁决,和“出”,如果重叠的底部或左执政。


下面是一种方法来确定一个粒子使用纽鲍尔血球计数。假设你进行如上所述的计数,计数187中所述的五个小方块颗粒。每平方米面积的1 / 25毫米平方(即,0.04平方毫米)和0.1毫米的深度。在每平方米的总体积为(0.04)×(0.1)= 0.004立方毫米。您有五个广场总体积的5倍(0.004)= 0.02立方毫米。因此,你算体积的0.02立方毫米187颗粒,给你187 /(0.02)= 9350每立方毫米的颗粒。有一个立方厘米(毫升)1000立方毫米,因此颗粒计数每毫升935万。


细胞通常足够大,需要在一个较大的比表面积的计数。例如,您可能计数细胞总数在四家大型角落广场,加上中间相结合。每平方米表面积的1平方毫米和0.1毫米的深度,给它一个体积为0.1毫米立方。假设你在5平方计算125个细胞(总)。然后你有125个细胞,每0.5立方毫米,这??是250个细胞/立方毫米。再次,乘以1000,以确定每毫升细胞计数(250,000)。


有时候你会需要稀释细胞悬液,以获得足够低的细胞密度进行计数。在这种情况下,您将需要您的Zui终计数乘以稀释倍数。例如,假设你的计数稀释10倍衣悬挂。假设你获得了25万细胞/ ml的Zui后的计数如上所述。然后在原始(未稀释)暂停计数是10 × 25万,这是250万细胞/ ml。

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